组织培养育苗繁殖效率高,不受季节和灾害性气候的影响,可周年繁殖,且材料能以几何级数增殖,繁苗速度快。培养技术简单易行,管理方便,培养条件可人为控制,利于自动化管理,实现工厂化生产。无性繁殖的方式可保持母体的优良性状,均匀一致,苗木质量好。在某些植物上还能解决不能用种子繁殖的快速繁殖问题等。
1、材料的选择和处理 选择优良的核桃品种,生长健壮、污染较少的母株作为外植体的来源。一般大田的材料汚染较多,不容易获得无菌系,可将其栽培在温室内,以减少污染。少量材料也可用水培的方式获得嫩枝。
进行培养时剪取当年生的嫩枝,剪去复叶,剪成3~4厘米的带腋芽茎段。先用自来水流水冲洗1~3小时,在无菌条件下用75%酒精灭菌30~50秒,再用 0.01%升汞浸泡3~8分钟,最后用无菌水冲洗3~5次,以备接种。
2、培养步骤
(1)茎尖(段)培养 最常用的茎段培养基是DKW培养基。将灭菌的茎段切去两端1毫米的端面,植人培养基中。培养条件是温度25℃,光照强度l 000~3 000勒克斯,光周期14~ 16小时光照,8~10小时黑暗。
(2)继代扩繁 是茎段培养的主要一步。一种方法是促进腋芽的快速生长,一种是诱导形成大量不定芽。通过腋芽增殖的方法可以保持品种的优良特性,发生变异的几率较小,增殖速度快,理论上一年内1个芽可增殖10万株以上。诱导不定芽会产生较大几率的变异。增殖后形成的丛生苗或単芽苗分割后,转移到新培养基中继代培养,4~8周继代一次。一个芽苗可增殖5~ 25个小苗, 并进行多次继代培养,满足生产需求。
(3)生根培养 继代扩繁的芽苗没有根,一般需要在生根培养基中诱导生根。生根时所用的基本培养用 MS培养基,但需降低无机盐浓度,一般用1/2或1/4的量,并减少或除去细胞分裂素,增加生长素的浓度。在生根阶段辅以黑暗条件,则生根效果更好。
还有一种用芽苗扦插的方法来生根的。先将芽苗在生长素中快速浸藤或在含有相对高液度生长素的培养基中培养5 ~ 10 天,然后栽入温室中的培养基质(珍珠岩:蛙石=2:1)中,经常喷雾,几天后可自行生根。
由于核桃组培苗生根的问题一直没有得到很好的解决,因此只需提供没有生根的接穂,进行芽苗嫁接,不进行生根培养。
3、炼苗及移栽 移植是一个由异养转变为自养的过程。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节,也是最费工的一个环节,这个工作环节做不好,就会使组培育苗前功尽弃。
( 1 ) 移栽用基质和容器 常用的移栽基质有珍珠岩、蛭石、沙子等,可采用単一基质或复合基质。移栽组培苗的容器常为6 厘米x6厘米的塑料钵,也可使用育苗盘。
(2) 移栽前的炼苗 试管苗移栽前要先将培养容器不开口在自然光照下锻炼2~3天,让试管苗接受强光照射,再开口炼苗1~2天,经受低温锻炼,以逐步适应外界环境条件。
(3)移栽和幼苗的管理 试管苗移栽时,应首先洗去根部附着的培养基,避免微生物的繁殖污染,造成小苗死亡。移栽后要保持较高的湿度,并进行遮光。以后逐步降低湿度、增加光照,直至与外界环境相同。
经过温室移栽成活的小苗培养一段时间,长出新根和新的叶片后可移栽到大田。
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2020-11-27 20:32:48